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wb成像系統在wb實驗中該如何使用？你知道嗎？
  • 發布日期：2023-07-18     信息來源：公司新聞      瀏覽次數：17129

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      　　wb成像系統是否能夠拍攝到ECL的圖像主要取決于設備是不是帶有制冷的CCD，只有制冷的CCD才夠靈敏地捕捉到膜上發出的光。隨著Cooled-CCD技術的發展，成像系統成本越來越低，因而在現在的實驗室里這些設備越來越普遍。本實驗室目前采用的是wb成像系統，具有靈敏度高，成像速度快、成像效果清晰等優點。
       
      　　
      wb成像系統儀器的使用非常簡單：
       
      　　1)在使用前開機預冷，待儀器溫度降到-20℃才可以進行檢測;
       
      　　2)將化學發光檢測試劑盒中的A和B按照1:1混合;
       
      　　3)PVDF膜正面朝上放于暗箱，用移液槍將發光液均勻地涂在膜上，關閉暗箱箱門，進行曝光;
       
      　　4)曝光可以自動曝光，也可手動曝光，一般先點擊自動曝光，觀察成像效果，若不理想可再手動調節曝光時間;
       
      　　5)外wb成像系統還具有多張拍攝模式，可將一張膜在不同的曝光時間下連拍6張，使曝光更方便。內參一般顯影15s(影像條帶粗細深淺一致說明內參已調齊)，內參好說明各步實驗操作均無誤，即可進行后續的目的蛋白檢測，目的蛋白結果的好壞就取決于其表達量以及抗體的特異性和效價了。
       
      　　6)與X膠片相比，wb成像系統具有瞬時影像處理、立即輸出、不需要膠片處理裝置及暗室等成本花費、可用軟件半定量分析等優點，因而在現在的實驗室里wb成像系統的使用已經逐漸取代傳統的暗室壓片曝光檢測。

      wb成像系統

      wb成像系統

       



       
      　　wb成像系統在一般的wb檢測過程中，都會有膜的封閉、一抗孵育、二抗孵育和底物顯色這四道“加工”工序。wb顯色的方法主要有放射自顯影、底物化學發光ECL、底物熒光ECF和底物DAB呈色四種方法，運用到實驗中包括：
       
      　　1、發表文章通常是用底物化學發光ECL，操作比較簡單，只需要購買現成的化學發光檢測試劑盒即可。
       
      　　2、試劑盒中一般使用的反應底物A和B分別是魯米諾(又名發光氨) 和過氧化氫，原理如下(二抗用HRP標記)：在HRP的催化作用下，魯米諾與過氧化氫反應生成一種過氧化物，過氧化物不穩定隨即分解，形成一種能發光的電子激發中間體，當后者由激發態返回至基態，就會產生熒光，可用X膠片和成像設備進行檢測。
       
      　　3、使用傳統的X膠片顯影方法進行wb實驗時，后需要使用暗室曝光來進行ECL檢測，但是建造暗室浪費空間，在暗室中曝光步驟繁瑣，沖洗X光片時會接觸有毒的化學藥劑。
       
      　　4、wb成像系統能夠對ECL發光直接成像，獲得實驗結果，避免暗室曝光的不便。

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